Seminário Internacional de Ciências Farmacêuticas — Método CRISPR

Quando surgem sintomas ou dúvidas envolvendo Seminário Internacional de Ciências, distinguir informações cientificamente validadas de condutas paliativas faz toda a diferença na evolução da saúde respiratória, cutânea e sistêmica. Esta página tem por objetivo aprofundar o entendimento sobre "Seminário Internacional de Ciências Farmacêuticas — Método CRISPR", contextualizando de forma didática como o sistema imunológico reage, quais sinais merecem atenção médica e como estruturar um cuidado individualizado e eficaz.

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Análise Clínica e Orientação Médica sobre Seminário Internacional de Ciências

Esqueceram boa noite da espada jacksonville uh é uma grande honra ouvir o seu palavras sobre crispr este nascimento ii poderia dizer crispr é um capítulo intrigante da medicina é um capítulo intrigante da vida e ii tenho certeza que isso admite que você será bem sucedido e eu gostaria de agradecer a você e ao dr rabio lanot por aceitarem o convite agora vou compartilhar minha tela para começar minha palestra esqueceram um estrangeira uh é uma [Risada] esqueceram é um comece seu discurso bem vindo ao simpósio obrigado pelo convite deixe-me começar minha apresentação trabalho de pesquisa usando a tecnologia crispr cast 9 a apresentação de hoje será dividida em parte primeiro apresentarei o uso do tecnologia crispr cas9 para tratar a doença estável do ferro e minha pós-graduação a aluna gabrielle lamont apresentará todos os derivados do crispr cas9 tecnologia pode ser usada para detectar infecção viral a palavra crispr significa repetições de penetração curta no interespaço regulatório agrupado A tecnologia do sussurro cas9 é derivada de pesquisas sobre bactérias, foi descoberta inicialmente em 2005 que a sequência crispr continha sequência viral e ainda havia uma hipótese de que crispr cas9 é o sistema imunológico bacteriano foi só em 2013 que se descobriu que o crispr cas9 pode ser usado para induzir modificação específica do genoma humano e isso começou uma grande explosão de artificial na verdade, o sistema de fundição crispr é usado por bactérias para matar bacteriófago são extremamente abundantes são dez vezes mais abundantes em bactérias e há uma guerra em curso entre bactérias e bacteriófagos há milhões de anos foi inicialmente descoberto que eles estão na área do genoma sequência repetida constante pesquisadores estavam se perguntando para que serviam essas sequências repetidas e então descobriram que o sequência entre uma repetição constante foram sequenciados que vieram do genoma de vários bacteriófago na verdade o que normalmente acontece é quando um Bactérias infectadas por bacteriófagos normalmente a bactéria do vento bacteriano está morta, mas às vezes você tem um vírus defeituoso que infecta sem matar as bactérias, mas eles então ser capaz de adquirir alguma parte da sequência do vírus e ele armazenará isso em seu genoma e estará pronto quando precisar desse bacteriófago novamente no futuro a partir do DNA nas bactérias da área crispr irá primeiro expressar o pó pré-cr e depois haverá um complexo que será feito entre rastreador ou crna e a proteína de ferro fundido este complexo de proteína rna crna cas9 atacante se ligará às bactérias de hdna e induzir um corte do dna do bacteriófago para essencialmente matar o vírus para se ligar ao dna a proteína cas9 requer a presença do espaçador total motivo adjacente que é simplesmente njj para esses streptococcus pyrogene caminho, então há um crrna que contêm uma sequência variável de 20 nucleotídeos que será complementar à sequência do bacteriófago e depois há também o rastreador rna que é uma constante sequência de rna que forma um complexo com o crm quando as três partes estão juntas cr rna rastreador ou uma proteína de ferro fundido, um corte será induzido em exatamente três apertado da planta, é claro, já que esta é uma guerra, há medida de contorno que são tomadas pelo fago eles irão mutar seu genoma para que eles se tornem resistente não reconhecido pelo crrna e sobreviverá defesa bacteriana o crispr cas9 big bang começou em 2012 quando a geração x e colegas perceberam que a tecnologia crisper cast 9 pode permitir cortam o genoma de planetas e animais eles também fundem seu cr rna e o rastreador rna juntos para formar um único guia rna isso foi feito essencialmente, porque o único guia rna é algo que pode ser patenteado enquanto o crn no rastreador sendo naturais não podem ser patenteados durante o ano seguinte, houve uma explosão de artigos confirmando que o casino crisper tecnologia pode ser usada para cortar o genoma de bactérias células humanas carbono animal rato drogas planta peixe-zebra voa nematóides macacos muitos desses artigos foram publicados em revistas de prestígio como a Nature ciência natureza biotecnologia célula molecular célula molecular houve uma rápida explosão de artigo e, como você pode ver, em 26 de novembro de 2020 21 420 artigos foram publicados onde a palavra crispr é mencionada a principal razão desta rápida explosão de artigos é que custa muito menos derivar uma sequência que será capaz de cortar uma sequência específica do genoma em comparação com outras tecnologia pré-existente, como proteína de dedo de zinco e alfaiates como mencionado antes da ligação da proteína cas9 ao dna exigir a presença de um espaçador de foto adjacente ao pam no local que é njj para o cas9 derivado da biologia do estreptococo há então a ligação também do rna guia único que reconhecerá a sequência de 20 nucleotídeos e quando o complexo é feito entre a proteína cas9 o rna guia único e o dna lá é um corte que será feito a exatamente três nucleotídeos da panela uma vez dentro do núcleo, o complexo resultante travará em uma sequência curta conhecida como pan o cast 9 irá descompactar o dna e combiná-lo com o rna alvo se a partida estiver completa, o cas9 usará duas pequenas tesouras moleculares para cortar o dna quando isso acontece a célula tenta reparar o corte, mas o processo de reparo é propenso a erros, levando a mutações que podem desativar o gene, permitindo que os pesquisadores entendam sua função essas mutações são aleatórias, mas às vezes os pesquisadores precisam ser mais precisos por exemplo, substituindo um gene mutante por uma cópia saudável, isso pode ser feito adicionando outro pedaço de DNA que carrega a sequência desejada, uma vez que o sistema crispr tenha feito um corte este modelo de DNA pode emparelhar com as extremidades cortadas recombinando e substituindo a sequência original pela nova versão um dos motivos da rápida explosão é que a tecnologia clássica do cristal também utilizou tudo o que foi desenvolvido pelo gene que foram os 30 anos que o precederam temos métodos para entregar o dna usando aav e, em seguida, vírus associados polímeros catiônicos lipossomas micro operação eletro de injeção todas essas técnicas são usadas no contexto de crispr quando uma quebra de fita dupla é produzida no dna, a maioria das quebras será reparada por adjacentes não homólogos que levarão a micro deleção ou micro inserção isso é frequentemente usado para eliminar a expressão de um gene alterando o quadro de leitura e também pode ser reparado por reparo dirigido por homologia que requer a presença do doador dna que contém sequência de homologia com o que está retrocedendo o que está seguindo o corte e depois entre as duas sequências de homologia há uma sequência em azul que pode ser um único nucleotídeo ou um gene inteiro que será inserido ao lado do quebra de fita dupla quando usamos o crispr classe 9 tecnologia pretendemos produzir uma quebra de fita dupla em um local preciso no genoma humano no entanto, o elenco 9 pode às vezes induzir corte em outros locais do genoma que são chamado software de computador de mutação alvo buff pode prever essas mutações fora do alvo usando toda a sequência do genoma humano, porém esses softwares não são perfeitos e às vezes eles imprimem a mutação alvo no local onde não há corte e às vezes haverá um corte no lado que não é previsto pelo computador existem ou no entanto algumas técnicas experimentais, como um método de pilha de guias, que permitem para identificar experimentalmente os locais de mutação alvo este guia técnica usou a introdução de um oligonucleotídeo curto de 34 pares de bases nas laterais dos cortes e posteriormente por pcr o local de inserção pode ser identificado sequenciando a presença desses fora do alvo mutação é o principal problema que atrasa o uso da tecnologia crispr cat9 para correções diretas do veículo um dos métodos para reduzir a mutação alvo é simplesmente reduzir em dois ou três o número do rna guia único que se liga ao dna alvo outro método é usar uma nuclease cas9 mutada que corta apenas uma fita de dna é então chamado de caso do joelho há variação de cas9 onde as cáries cortam apenas o fita inferior de DNA e outras mutações da classe 9 que permitem cortar apenas a parte superior fita de dna é assim possível induzir mais quebra de fita dupla precisa no dna usando o cas9 nikkei e dois rna guia único, cada um detectando uma sequência de 20 nucleotídeos perto de uns aos outros também é possível usar um fusível de nuclease cas9 cas9 não funcional com aquele nucleados, então dois rna guia são novamente necessários para detectar sequências que estão próximas outro e o sapo uma nuclease precisa formar um dímero para poder para cortar o dna finalmente alguns pesquisadores sofreram mutação o gene que codifica a partir do elenco 9.

Eles modificaram alguma sequência que codifica para amino ácido para reduzir a ligação não específica entre o cas9 e o dna o gene sp cas9 é muito grande para ser inserido com um único rna guia dentro de um adeno vírus associado e, portanto, os pesquisadores identificaram cas9 de outras bactérias que são menores por exemplo o estafilococo é menor que o sp 9, mas tem um caminho diferente que é mais restritivo outro tipo de enzima crispr cas9 foi identificado, é chamado de cpf1 produz cânceres pegajosos é outro corte de sangue do dna há apenas uma série inteira de vários valores de contenção cas9 com kylia que requerem abas diferentes a tecnologia crispr cas9 pode ser usada não apenas para reduzir cortes no dna, mas também para induzir a expressão de um gene fundindo cas9 com bp 64 por exemplo ou escolhendo cast 9 com caranguejo para corrigir a expressão de um gene no meu grupo de pesquisa estamos usando a tecnologia crispr cas9 para desenvolver terapias para várias doenças ataxia transversal distrofia muscular de duchenne e doença de alzheimer vou apresentar agora inicialmente usamos a tecnologia crispr cas9 para desenvolver um tratamento para fredrich ataxia é uma doença de elixir devido à presença de um nucleotídeo long try com b gaa no íntron um do gene da fataxina esta longa repetição reduz a expressão do gene da fataxina levando a problemas neurológicos e cardíacos acabamos de usar o crispr cas9 tecnologia e gerado guia único rna capaz de cortar no intron 1 antes e após a repetição do trinucleotídeo levando à sua remoção e aumentando a expressão da ataxia de fato, a remoção da repetição de trinocleotídeos nas células do yga modelo de camundongo sr de ataxia fredérica dobrou a expressão de frataxina em comparação com as células não tratadas e elevou a expressão de proteção para quase o nível normal o gene sp cas9 é muito grande para ser entregue com dois rna de guia único por um único aav, estamos usando apenas o menor cg cas9 gene para remover a repetição de trinucleotídeos no íntron 1 do gene da fataxina usando esta nuclease cg cas9 menor também somos capazes de remover a repetição de trinucleotídeos no íntron um do gene da frataxina também estamos usando a tecnologia crispr cas9 para desenvolver um tratamento para duchenne distrofia muscular a distrofia muscular de duchenne é devido a mutação em um gene que codifica para a proteína distrofina é um gene grande contendo 79 éxons alguns desses éxons não contêm um múltiplo de três nucleotídeos e, portanto, 70% dos casos de distrofia muscular de duchenne são devidos à deleção de um ou vários exames e o número total de nucleotídeos de codificação que são deletados não é um múltiplo de três por exemplo nesta apresentação temos uma deleção do exon 50 que não contêm um múltiplo de três nucleotídeos, isso leva a uma mudança de quadro e haverá um códon de parada no exon 51.

Proteína distrofina é expressa, mas não o final da proteína distrofina esta situação pode ser corrigida induzindo o salto que é uma remoção do exon 51 no rna mensageiro isso é feito usando o nucleotídeo poligonal antisense este exame 51 também pode ser excluído induzindo cortes no íntron 50 e na frente 51 para remover completamente esse exon, isso resulta na expressão do início da proteína distrofina e do fim da proteína distrofina, mas há, no entanto, uma pequena parte da proteína que está faltando no centro da proteína a retirada de um ou vários exames completos pode assim restaurar o quadro de leitura e converter um paciente duchene em um paciente de Becker, no entanto, alguns pacientes de apoio têm sintomas e são obrigados a uma cadeira de rodas aos 11 anos.

Portanto, a melhora de algumas distrofias musculares de duchenne pode não ser significativa isso ocorre, porque a proteína distrofina tem uma estrutura complexa de fato em sua parte central a distro proteína fin contém 24 repetições semelhantes a espectro cada espectro como repetição é feito de três hélices alfa hélice a lxb e lxc observe que lxa está começando no lado esquerdo e elixi está terminando no lado direito e normalmente há uma sucessão de abc abc o principal problema de deletar o exon completo para restaurar a expressão da proteína distrofina é que o início e o fim do espectro como repetição indicado neste esquema pelo preto seta não correspondem ao início e ao fim dos exílios e, portanto, ao remover a exaustão completa o resultado da estrutura de repetição do tipo espectro pode não ser normal paciente com distrofia muscular vetorial tem uma exclusão de um ou vários exames, mas o total número de nucleotídeos de codificação que são deletados é um múltiplo de três nucleotídeos e portanto, não há mudança de quadro, este é o caso, por exemplo, do paciente Becker ter uma exclusão do exame 45 a 47 ou com exclusão de 45 a 49 em ambos os casos não há mudança de quadro no início e no fim da proteína distrofina são expressos, no entanto, no local de junção entre os códons restantes, há um estrutura da proteína distrofina e devido a esta estrutura anormal da proteína distrofina esses pacientes vetores são vinculados a uma cadeira de rodas em tenra idade anoitecer no meu grupo de pesquisa em vez de tentar restaurar o quadro de leitura normal excluindo exons completos, visamos produzir exames de habilitação 5054, que não apenas restaurou um quadro de leitura normal, mas também codifica uma proteína distópica com um estrutura normal, fizemos nossos experimentos iniciais usando o mioblasto de um paciente duchenne tendo uma exclusão do exame 51 52 e 53.

O número de nucleotídeos de codificação não era um múltiplo de três havia um códon de passo no exon 54 devido à mudança de quadro, acabamos de usar a tecnologia crisper cast 9 para induzir um corte no exon 50 e um corte no exon 54 para criar o ebrate exon 5054 para produzir este exemplo implicado identificamos inicialmente quais são os possíveis sp cas9 pan ou quais são os locais onde podemos cortar no exon 50 e no exon 54 identificamos 10 vezes locais no exon 50 e 14 tamanhos diferentes de pan no exon 53 esta tabela prevê quais são os resultados da indução de cortes no exame 50 e no exame 54.

Quando temos um quadrado azul significa que o corte foi produzido no exon 50 logo após os três nucleotídeos e pede um aminoácido e o corte foi produzido no exon 54 logo antes dos três nucleotídeos que codificam um aminoácido, portanto, no ponto de junção, temos o amino ácidos que são um escoltado pelo exon 54 seguido imediatamente por um aminoácido codificado por exemplo, não há mudança de quadro e não há novo aminoácido, porém quando a praça está limpa isso significa que temos no entroncamento local um novo aminoácido que é produzido, porque estamos presos no exon 50 logo após um dos nucleotídeos de um códon e os dois nucleotídeos que irão completar esses códons são do exemplo antes de cortarmos logo após um nucleotídeo do códon no éxon 54 e, portanto, os dois primeiros nucleotídeos deixados para criar um novo códon no sítio de junção, há assim um novo aminoácido no sítio de junção, mas não há mudança de quadro e todos os outros aminoácidos são os corretas também é possível neste quadrado em vermelho para ter um novo códon produzido no local de junção, mas este novo códon é um códon de parada isso não é real, queremos fazer todos os quadrados de largura, porque há uma mudança de quadro que estamos cortando após um nucleotídeo de um códon no exon 15 e estamos cortando antes do último nucleotídeo de um resfriamento no exon 54 e, assim, adicionamos a junção lado há um novo códon que é feito, porque há uma mudança de quadro e todos os aminoácidos a seguir não são os corretos temos testadores de poeira vários pares de ironia guia uma ironia guia cortando na zona 50 e o outro corte de rna guia no exon 54 acabou de produzir um exame ibrit 1554 que tinha o tamanho previsto para este exame híbrido, observe que quando estamos fazendo cortes no exame 50 e no exame 54 em uma distrofina normal estamos excluindo 160 000 pares de bases e apesar disso a junção entre exon 50 e 54 é do tamanho previsto sequenciamos este exame híbrido que foi produzido por corte no exon 50 e no exon 54.

Não apenas o exame eblid era exatamente do tamanho previsto, mas a sequência também foi exatamente tão preditiva por exemplo, tivemos um local de junção das fusões do exon 50 no exame 54 produzindo exatamente o aminoácido previsto, também obtemos no sítio de junção um novo códon codificação para o aminoácido previsto ou codificação para um códon de parada e em algum momento, como previsto pelo quadrado branco, tivemos uma mudança de quadro e quando houve uma mudança de quadro, havia códons de parada que se destinavam aos exílios liberais resultantes como mencionado anteriormente a proteína distrofina contida em sua parte central 24 espectros como repetir cada um sendo feito de três alfa-hélices ab e c acabamos de usar um guia rna para induzir um corte no exon 50 em uma sequência de codificação para lxc e outro guia rna induzindo um corte no exon 54 também em uma sequência que codifica para a hélice c o exon evidente resultante 5054 pede um ibrim elixi onde o início de nxc é codificado pelo exon 50 e o final do elixi é codificado pelo exon 54.

Esta é uma estrutura que foi prevista por computador usando a sequência do resultado proteína quando o biovidro desta duchenne paciente com deleção do exon 51-53 são fundidos para formar alguns pequenos fibras musculares e cultura chamadas miotubos, na verdade, essas fibras musculares não expressam distrofina, porque este é um paciente de duchenne no entanto o mioblasto de um humano saudável quando se fundem formam um pequeno biotubo e expressam este tópico como pode ser visto aqui neste Western sangue quando utilizamos o bioblasto do paciente duchenne e induzimos a formação do zona ignitiva 5054 temos expressão da proteína distópica em cultura e como você pode ver esta proteína distrofina tem um peso molecular menor do que o normal distrofina, porque há deleção do exon 51 a 53 e uma deleção adicional de parte do exon 50 e parte do exame 54.

Parte da proteína distrofina que está ausente é por isso que a proteína é menor, mas, no entanto, é expresso para nossos experimentos individuais iniciais, usamos o modelo de mouse html este é um camundongo transgênico que expressa o gene da distrofina humana todos os íntrons e todos os éxons que eletroporamos no músculo de este revestimento de plasmídeo de camundongo para os combustíveis sp cas9 com a proteína verde fluorescente e dois rnas de guia único isso um mês depois quando tiramos o músculo houve expressão da proteína verde fluorescente confirmando que o plasmídeo foi eletroporado corretamente nas fibras musculares levando à expressão do proteína verde fluorescente e provavelmente também levando à expressão do sp ferro fundido e depois de duas passadas de guia extraímos o dna dessas músculo e primeiro confirmamos usando um teste chamado de enzima, mas, de fato, eles estavam sendo constantemente produzidos no exon 50 e 54.

Use pcr para amplificar a zona eblatex 5054. Observe que nos músculos que não são tratados com a tecnologia crystal classe 9 não há amplificação do exemplo 5054, porque há 160.000 pares de bases entre esses dois exilados e, portanto, as duas cartilhas para o pcr são demais separados um do outro nós então sequenciamos este exon 1554 que foi produzido in vivo no músculo do camundongo expressando o gene da distrofina humana e como previsto tivemos a sequência de exon 50 e um novo códon no lado da junção seguido por todos os códons corretos que codificam para o aminoácido normal no exon 54.

Isso é exatamente como previsto in vivo no entanto, para a entrega do gene cast 9 no mal para vários músculos precisamos usar um vírus adeno associado como mencionado antes do sp cas9 gene é muito grande para ser entregue com dois rna guia por um único aav e, portanto, usamos para nossos próximos experimentos a faca fundida do staphylococcus moleus que é um cas menor que permitir a entrega com ironia de dois guias por um único avp neste caso usamos uh guia rna que induziu cortes no exame 47 em uma sequência de codificação para lxb e no exon 58 em uma sequência novamente codificando para elix b isso resultou na formação de um exame de ebola 4758 codificação para um lxb ibrigid que tem uma estrutura normal o começo do exp ser codificado pelo exon 47 e o fim desse mal Philips estar sendo codificado pelo exon 58 então usamos para nosso experimento imbibo um novo modelo de mouse chamado hdmd delta 52 é o mesmo modelo de camundongo anterior que contém o gene da distrofina com todos os éxons e todos os íntrons, exceto que este camundongo tem uma deleção do exon 52 e, portanto, não há expressão do gene disfórico humano acabamos de usar o crispr classe 9 tecnologia para induzir um corte no exot 47 e um corte no exame 58 produzindo o exame de ibrina 4758 resultando na produção de um proteína distrofina contendo um exame mal a cada lxp injetamos neste mouse hdmd delta 52 aevs codificação para sc 9 e 2 guia único rna um mês depois observamos no músculo a expressão do gene da distrofina humana, incluindo no coração estamos apenas propondo um tratamento da distrofia muscular de duchenne que seria a entrega sistêmica por um vírus adeno-associado do gene da classe 9 e de dois rna guia para formar qualquer exame de pão em contraste com o salto de exon, que é um tratamento feito ao nível do mensageiro rna o tratamento que propomos ao nível do dna seria permanente a tecnologia crispr cas9 está evoluindo rapidamente e novas tecnologias derivadas do crispr cas9 permitem agora a modificação de um único nucleotídeo mais de 32.000 nucleotídeo único modificações são responsáveis ​​pela doença estável precoce e, portanto, a capacidade de corrigir um único nucleotídeo forneceria tratamento para a maioria destes curando doença estável o primeiro tratamento que permite a modificação de um único nucleotídeo foi desenvolvida por kamal em 2017 que usa um cas9 nikkei que é o cast 9 modificado que é capaz de cortar apenas um filamento de dna e este estojo fundido 90 é fundido com acetaminofeno esta tecnologia é permanente para modificar clinicamente o city bean em um uvd que é substituído por um tempo no dna a principal limitação dessa técnica é a modificação química da cidade ocorrerá em uma janela estreita localizada em 12 a 16 pares de bases do ngg pan usamos inicialmente a edição base tecnologia para desenvolver um tratamento para a doença de Alzheimer a doença de Alzheimer é produzida por um metabolismo anormal da munição proteína normalmente esta proteína é cortada pelos secretários alfa seguido por um corte pela célula gama estas proteínas peptídeos e proteínas fragmentos que são degradados sem causar problemas, porém esta proteína também pode ser cortada por a sequência beta seguida por um corte pelas sequências gama e isso produziu infecções curtas de 40 42 aminoácidos beta amigo longo que se agregam a uns aos outros formando aminoácidos que interferem na transmissão sináptica levando à morte do neurônio e os problemas de memória este esquema ilustra a sequência de aminoácidos da parte transmembrana do proteína repressora anaeróbica podemos ver a posição do beta alfa e gama separa calcita todos os aminoácidos na estrela acima seus principais são aminoácidos que são modificados levando a família ou forma da doença de alzheimer, por favor, observe a posição com a seta vermelha esta é a alanina na versão 673 quando esta adenina é alterada por vale isso leva a doença de Alzheimer de início precoce grave e você são um zemer aos 40 anos.

No entanto, quando esta adenina é alterada por uma viagem você não é alzheimer mesmo quando tem 95 105 anos como mostrado por johnson nepal na natureza 2012. A presença da mutação a673t também conhecida como a mutação islandesa reduzir a secreção de mutação de um beta 40 em nosso peptídeo de qualidade de dados para o appg do tipo selvagem e para appg contendo a mutação london nossos experimentos mostraram que a presença da mutação h673t reduzir a secreção de um peptídeo beta 40 e beta 42 pelo epp genes não apenas para o gene do tipo selvagem, mas também para genes app contendo vários genes familiares.

Mutações da doença de Alzheimer como mencionado antes, a tecnologia de edição base crispr cas9 permite modificar o reitor da cidade em um momento acabamos de usar a tecnologia de edição básica para direcionar o citoplano no fita antecedente do códon de alanina transformando essa citodina em um e apenas mudando o códon de alanina em um triângulo o principal problema com esta abordagem é que, embora queiramos modificar a citodina na fita decente do códon de adenina existem outros nucleotídeos de acidez próximos que também são afetados pela abordagem de edição básica construímos 14 enzimas de edição de base diferentes para poder quantificar mais especificamente modificando a cidade e o códon anti-sentido de led, conseguimos introduzir mutação em até 17 do avpg, porém outra acidez também localizados na vertente antecedente também foram modificados pelo sujeito uma nova tecnologia fantástica chamada privacidade foi recentemente desenvolvida por lápis sobre topo com licenças em princípio a tecnologia de edição principal usa um novo fusível de caixa cas9 com uma transcriptase reversa também requer um guia de edição principal conhecido como um porco rs o rna do porco é essencialmente um rna guia único prolongado, portanto, tem um único guia rna contém uma sequência espaçadora que reage com 20 nucleotídeos no dna de destino, ele também contém o andaime constante do único guia rna que está em vermelho e depois no seu cinco extremidade prime há um prolongamento com o lado de flexão do primer que é um sequência de 10 a 17 nucleotídeos reagindo com a parte superior fita de dna que é seguida pelo molde da transcriptase reversa novamente, que tem 10 a 17 nucleotídeos de comprimento e que conterá alguns nucleotídeo em vermelho neste caso indicando qual nucleotídeo tem que ser modificado pelos transcriptivos reversos um plasmídeo desenhado por anzalo natal está disponível no edgy para construir um novo peg rna este plasmídeo continha um gene de proteína fluorescente vermelho que pode ser removido por cortes bsa1 que produzir uma espinha dorsal da proteína e, em seguida, os outros componentes são o primer espaçador que liga o lado inverso modelo de transcriptase e o couro cabeludo de RNA de porco, todas essas sequências são únicas nucleotídeo poligonal encalhado que pode ser adquirido da idt essas quatro partes são então montadas juntos para produzir uma nova garantia de pagamento para usar a tecnologia de edição principal, primeiro temos que identificar a guia positiva adjacente ao espaçador de fotos que é njj para a classe nove de streptococcus pyrogene isso permitirá que o cas9 se ligue ao dna, então a sequência espaçadora do peg rna se ligará a uma sequência de 20 nucleotídeos de dna, neste caso a fita inferior e a formação do complexo entre o peg rna classe 9 décadas e o dna induzirá o corte a exatamente 3 nucleotídeos do caminho na fita superior de dna, isso liberará a fita superior de dna para poder interagir com o primer de ligação do lado da pilha o peg rna e depois o inverso molde de transcriptase que continha alguns nucleotídeos a serem mutados estará disponível para o transcriptase reversa para sintetizar um novo DNA força superior significa distrofia muscular de duchenne paciente tem uma parada chamada no dmdg, pois não tivemos acesso às células do paciente contendo tal apontamento decidimos introduzir esses códons de parada usando a tecnologia de edição principal, então em cada caso tivemos que identificar um ngg pam identifica a sequência do espaçador de fotos peg rna e, em seguida, modificar o modelo de transcriptase reversa para entrar para modificar o códon para um aminoácido em um códon de parada neste caso nós mudamos acetaminofeno para introduzir o material tga usamos com sucesso essa abordagem para apresentar os acionistas no exame 9 20 35 42 55 e 61.

Acabamos de projetar vários peg rna direcionados ao dmd exon 35, como você pode ver, variou o molde da transcriptase reversa em azul de 10 a 16 nucleotídeos e também variamos o sítio de ligação primária em verde de 10 a 15 nucleotídeos e no local de mutação desejado que introduzimos em introduzir essa mutação nossos experimentos iniciais foram feitos em células hek293t tentamos reproduzir a mutação de mx1g e direcionar dmd exon 35.

Então, essencialmente, essas células foram transfectadas com codificação de plasmídeo para o cas9 djs se funde com os dias de transmissão reversa e um rna pago visando o exon 35 do gene dmd ou o e mx1 g o dna foi extraído três dias depois e a sequência alvo foi amplificada por pcr e sequenciada usando o método central a sequência foi analisada usando o programa online edit r essencialmente observamos uma mutação de correção de 32 por cento do gene air x1 tem feito por heads along, no entanto, para a mutação do exon 35 tivemos um fundo de dois por cento na sequência do controle negativo controle e com os diferentes peg rna temos mutação variando de quatro a oito por cento, então isso não foi tão bom quanto para o emx one g acabamos de tentar um método diferente para tentar aumentar a porcentagem de edição do genoma do exon 35.

O primeiro método que tentamos é repetir o tratamento três vezes essencialmente as células foram transfectadas com plasmídeo no 0 6 12 e o DNA foi extraído três dias e seis dias após cada tratamento amplificamos o exon 35 pcr em cada uma das extrações data e sequencia por centro e sequência do analisador como você pode ver a porcentagem de edição do genoma aumentou do dia 3 para o dia 18 com o tratamento e este foi o caso de todas as três redes peg rna visando o exon 35.

Testamos então um segundo método para tentar aumentar a porcentagem de mutação no exon 35. É para induzir um segundo corte no alvo g este é o método pe3 essencialmente, identificamos duas sequências pam que permitiram ao kite rna induzir um segundo corte em 57 nucleotídeos do original grande ironia vizinha 24 horas nucleares ou a 57 nucleotídeos induzidos pelo porco houve um aumento significativo na adição da propaganda do gene alvo 35 quatro e figura oito por seis, mas não para maior apenas 20,5 você ainda tem que entender por que i método para melhorar a porcentagem de mutação no gene alvo é mutar o pam usado pela harmonia de peg acabamos de projetar rna de porco que não só foi capaz de introduzir um códon de parada mutação, mas também somos capazes de mutar simultaneamente a panela e o uso mutação do pan usado pelo peg rna melhora a porcentagem de mutação em o códon de parada para dois dos três peg rna que nós testei combinando os dois métodos que estão induzindo um segundo corte no alvo g e a mutação do pan usado pelo peg rna aumenta ainda mais a mutação do dmd exon 35 a 39 com todos os três pinos que temos testado estamos atualmente iniciando um novo projeto para corrigir a mutação responsável por outros títulos constantes doença estamos trabalhando na fibrose cística devido a mutação no canal de cloreto cftr na distrofia muscular congênita por mutação no receptor da reanodina e na ataxia 8 devido a mutação no nkx6 gene tipo 2 para cada doença auditiva estável devido a uma mutação pontual, por exemplo, aqui com ataques em tipo 8 é possível corrigir em princípio o gene mutado usando a edição prime tecnologia neste caso aqui podemos identificar que a mutação é uma mudança de adenosina para o tempo e assim podemos identificar um pan ng para o sp cas9 que está próximo do mutante nucleotídeo podemos então projetar um RNA plano que irá introduzir a mutação desejada neste caso estamos introduzindo duas mutações, uma para corrigir a mutação reverter a timodina em adenosina e a segunda mutação do ponto médio é modificar o caminho para que, seguindo o correção a enzima catiônica não pode mais se ligar ao dna tecnologias derivadas de cassinos mais nítidas não podem ser usadas para tratar muitas cidades diferentes doenças o principal problema permaneceu a inibir a entrega dos agentes de edição Obrigado pela sua atenção ok obrigado professor jax vou aproveitar a vez para fazer um comentário geral para quem não fala uh quem não fala inglês ok obrigado pela sua apresentação obrigado de eu esqueceram uma música] ele resume o seu discurso ok não a música sim senhor muito obrigado pela tradução do meu resumo em português okay um esqueceram é gabriel obrigado por me receber uh vamos ver se podemos começar sim uh você pode ver oi meu nome é e hoje eu estarei discutindo a detecção de estrelas usando tecnologia de cristal nomeou o teste que temos desenvolvimento e os estudos do Hospital do dr tremblay confirmaram que muitos indivíduos infectados com vírus terra ob2 ou portadores assimétricos você não pode ouvir ainda não sim você pode ouvir não, apenas talvez você deve falar ok, eu posso realmente tentar transmitir de outra maneira, se for esse o caso, então ok oi meu nome é gabriel lamot e hoje estarei discutindo a detecção de cyrus kovi sim isso é muito melhor é o som melhor agora e2 usando tecnologia crispr oh perfeito nomeadamente o teste que temos vindo a desenvolver nos estudos de laboratório do dr trombley confirmaram que muitos indivíduos infectados com o vírus osiris-cov2 são portadores assintomáticos do vírus isso é problemático, pois a pandemia pode estar crescendo sem supervisão adequada, simplesmente concentrando os testes em indivíduos com sintomas em oposição a populações inteiras não é suficiente para melhor conter o vírus até que uma distribuição em larga escala de uma vacina eficaz esteja em andamento em larga escala e teste contínuo é obrigatório o pipeline de diagnóstico atual para detectar sars cov2 é um processo de três etapas, o primeiro passo é obter swabs nasofaríngeos de pacientes o próximo passo é isolar o rna total das referidas amostras e fornecer o rna necessário para isso terceiro passo, que é usar máquinas de videogravador quantitativo em tempo real, o rna é primeiro transcrito inversamente em dna e, em seguida, amplificado, um corante é adicionado à reação de amplificação para sinalizar a presença de dna fitas após um certo número de ciclos de amplificação, um resultado positivo dará um sinal forte o suficiente para que a máquina o sinalize como contendo o vírus original agora esse processo é problemático para um algumas razões, a primeira é que as máquinas de PCr em tempo real são extremamente caras a maioria pode variar de quinze mil dólares americanos a mais de noventa mil dólares americanos dado que é um equipamento bastante especializado e que nem todos os laboratórios de biologia molecular precisam de um junto muito bem com uma máquina de pcr regular que custa muito mais razoáveis ​​5000 dólares americanos como tal teste generalizado para os coronifiers usando essas máquinas não é ideal adquirir o grande número de máquinas necessárias para testes generalizados é uma façanha por si só e é provavelmente um dos fatores que contribuem para os longos tempos de espera por resultados muitos relatos afirmaram que pode levar de 3 a 24 horas ou mais para obter resultados em uma clínica laboratório de diagnóstico aqui no Canadá ontário relata tempos de espera de até quatro dias para obter resultados áreas metropolitanas de alta densidade, como Nova York, também estão sujeitas a longas filas para testes e, em seguida, um tempo para resultados de cerca de sete dias para algumas clínicas daquela cidade a criação de novos tipos de testes de detecção é, portanto, um passo importante para conter a propagação deste vírus, um teste ideal precisa seguir o mundo os critérios da organização de saúde para garantir que é o teste precisam ser acessíveis para o maior número possível de pessoas em risco de infecção testes que exigem reagentes ou máquinas extremamente caras não são ideais o teste também deve ser específico para evitar falsos negativos dessa forma qualquer pessoa quem poderia espalhar o vírus pode ser identificado e colocado em quarentena o teste deve ser sensível para que poucas pessoas que não têm o vírus são rotuladas erroneamente como tendo e tratadas inadequadamente O teste também deve ser amigável ao usuário, ou seja, deve ser simples de executar e deve ser rápido e robusto, ou seja, deve dar um tempo aos resultados que seja rápido o suficiente para aproveitar ao máximo os resultados situações em que pode levar até sete dias para obter resultados estão claramente longe do ideal vez que o paciente recebe a informação que pode ter infectado muitos outros os testes devem ser livres de equipamentos tanto quanto possível testes que exigem muitas máquinas raras e caras não são ideais para muitos países, finalmente, o teste deve ser entregue a quem precisa a descoberta do cast 13 ou c2 c2 foi revolucionária no campo da detecção molecular este efetor crispr classe 2 tipo 6 é semelhante à proteína lançada 9 fora de qual terminação base e terminação prime foram projetadas esta proteína também é um membro da família crispr ao contrário do cas9, no entanto, o cast 13 pode ser programado para direcionar rnas em oposição a dnas ligando-se ao seu molde crispr rna 13 é preparado para direcionar sequências de rna extremamente específicas após localizar um alvo sequência a proteína cast 13 é ativada, isso faz com que a proteína comece a clivar tudo ao seu redor em um evento chamado clivagem colateral ele cliva seu alvo original e, em seguida, passa a começar a clivar todos os pesquisadores de rnas ao redor perceberam que isso clivagem colateral poderia ser usada para transformar a proteína em um interruptor para um teste de detecção uma vez a molécula alvo está presente o interruptor é acionado o cas13 ativado e todos os rnas circundantes são degradados por marcando certos rnas na solução com uma molécula fluorescente e um supressor seria, portanto, possível resolver um sinal que os pesquisadores começaram a desenvolver um teste de detecção baseado nesta proteína para vírus, bactérias e doenças humanas, como câncer no entanto, eles logo notaram que havia certas limitações para a proteína e que seu limite de detecção estava longe de ser sensíveis o suficiente para suas necessidades recentemente, alguns testes foram projetados usando apenas cast 13 no entanto, esses testes são menos sensíveis e tendem a usar uma proteína cast 13 diferente pesquisadores do amplo instituto decidiram complementar a proteína com algumas outras que amplificariam a direcione o rna para este fim dr zhang e sua equipe criaram um novo teste chamado de alta sensibilidade específica desbloqueio de repórter enzimático ou sherlock para abreviar este teste é baseado na transcrição reversa do rna alvo em dna depois o dna é amplificado em um temperatura constante usando um processo chamado amplificação da polimerase recombinase esta técnica amplifica uma pequena quantidade de dna a uma temperatura constante ao contrário do pcr mais comumente usado a incorporação desta etapa também significa que o teste de detecção que se segue pode direcionar o dna desde que a reação rpa simplesmente amplifica uma determinada seção de dna usando dois primers, a sequência genética inicial pode ser rna ou dna, desde que as enzimas transcriptase reversa estejam presentes para o rna as sequências amplificadas são então transcritas usando uma t7 rna polimerase para criar grandes quantidades do alvo rna isso permite que o cas13 tenha um pool muito maior de moléculas-alvo que pode ativar a enzima, uma vez que a enzima está ativa, ela faz o que discutimos antes e começa a clivar todos os rnas circundantes incluindo os rnas repórter que emitem o sinal facilmente detectável que faz o teste funcionar em sua versão inicial do sherlock test dois repórteres diferentes moléculas foram usadas o primeiro usou uma molécula fluorescente, bem como um supressor e foi capaz de produzir muita fluorescência após a clivagem do rna o outro foi projetado para interagir com alguns anticorpos e quando foi clivado apareceu como um segunda banda em uma tira que era bastante semelhante a um teste de gravidez embora esse teste tenha sido bom em muitos aspectos, ele teve algumas desvantagens no início da pandemia, tentamos replicá-lo e imediatamente teve alguns problemas, o maior problema de longe foi que alguns dos materiais necessários para o teste para trabalhar só estavam disponíveis em oferta extremamente limitada os kits necessários para realizar rpa reações, por exemplo, levaram aproximadamente dois meses para chegar e mesmo assim só recebemos o suficiente materiais para realizar 200 testes, isso claramente não seria suficiente para produzir testes suficientes no futuro, além disso, o repórter que usou uma tira estilo gravidez foi notável e parecia ser muito útil no entanto, uma vez que era muito difícil adquirir quantidades insuficientes decidimos não usá-lo e, em vez disso, concentrar nossos esforços no uso do repórter de estilo fluorescente rna desde a versão original do teste não pôde ser usado por nós da maneira que se pretendia, decidimos redesenhá-lo ao redesenhar o teste tínhamos várias opções e caminhos que podíamos seguir sabíamos que queríamos continuar usando cast 13, porque tínhamos um grande suprimento dessa enzima devido a uma colaboração contínua com o dr alain Yani também sabíamos que queríamos a todo custo manter a natureza isotérmica do neste teste uma das maiores vantagens do sherlock foi que ele não exigia grandes quantidades de equipamentos caros simplesmente usando um bloco de aquecimento ou algo do tipo era possível obter uma leitura visual decidimos, portanto, empregar amplificação isotérmica mediada por loop ou lâmpada para encurtar essa amplificação estratégia foi bastante bem documentada e fácil de executar com base no uso de seis primers esta técnica pode amplificar rapidamente grandes quantidades de dna alvo, ao contrário de rpa e pcr, no entanto, a lâmpada não cria amplicons idênticos de tamanho discreto, em vez disso, os seis primers podem interagir para criar moléculas muito maiores de uma sequência de repetição inicialmente era um pouco difícil incorpore essa estratégia de amplificação isotérmica em nosso teste, pois você pode se lembrar da etapa seguinte rpa no teste sherlock original foi aquele que produziu muitos e muitos rna alvo essa produção de rna alvo só foi possível, porque a etapa rpa adicionou uma tag que deixou o rna t7 polimerase se liga ao dna e começa a transcrevê-lo, no entanto, ninguém aparentemente nunca fez que com lâmpada e como essa nova técnica usou seis primers, dois dos quais se enrolaram para criar estruturas estranhas semelhantes a halteres, era difícil descobrir exatamente onde incorporar essa tag depois de um tempo, decidimos incluir a tag bem no meio de um de nossos primers de loop, isso tem sido consistentemente dado resultados muito fortes, fomos capazes de adaptar o sherlock original teste com uma nova estratégia de amplificação enquanto ainda se beneficia da especificidade e sinalização do cast 13 o novo teste está, portanto, usando rt lamp em vez de rt rpa, é claro devemos nos interessar em direcionar o DNA no futuro para certos tipos de vírus ou certas bactérias este teste seria prontamente aplicável a isso também decidimos usar um fluorescente repórter rna em vez do estilo de gravidez de que falamos anteriormente, porque parece ser o mais prontamente material disponível, uma vez que não é necessário nenhum maquinário particularmente avançado para fazê-lo funcionar ficamos felizes em escolher este agora que você sabe como o teste funciona do ponto de vista teórico, vamos discuti-lo de um ponto de vista mais prático por enquanto o teste requer que comecemos com rna que foi extraído de um vírus usando um kit comercialmente disponível microlitro desta solução é transferido para o tubo contendo a reação da lâmpada rt idealmente, no futuro, gostaríamos de modificar o teste para que seja possível adicionar diretamente a saliva de um paciente a ele e continuar a partir daí, o que reduziria visivelmente o trabalho necessário para obter cada leitura reduzir o custo geral e tornar muito mais rápido os resultados depois de transferir um microlitro do extrato de rna para o primeiro tubo, o tubo deve ser incubado a 65 graus Celsius por 30 minutos depois que um microlitro é transferido do primeiro tubo para o segundo que contém a solução de t7 e 13 depois de bater no tubo algumas vezes para misture e microcentrifugue por alguns segundos tudo o que você precisa fazer é incubar esse tubo a 37 graus Celsius por 30 minutos nesse ponto todas as reações são feitas e que os resultados estão prontos para serem ler expondo os tubos a um comprimento de onda de aproximadamente 490 nanômetros é possível facilmente detectar quais amostras contêm cyrus kov2, essas irão fluorescer um verde brilhante aqueles que não continham nenhum dos espécimes virais de interesse serão completamente incolores e indistinguível de um tubo cheio de um pouco de água eu vou te mostrar isso mais tarde agora vale a pena notar que as sequências de dna e rna que usamos nesta primeira versão do nosso teste foram todos publicados anteriormente por diferentes grupos, como tal, não acreditamos que eles resultar em um sinal positivo quando na presença de um rna relevante isso é particularmente importante, porque sua saliva está cheia de rna o processo de extração do vírus de fato resulta na captura de rnas virais, mas tende a haver muito mais rnas humanos e bacterianos, além de outros coronavírus que são muito menos perigosos são bastante comuns na população humana se nosso teste deu sinais positivos toda vez que alguém entrou com um resfriado comum, não seria muito eficaz, pois nos baseamos em modelos descritos anteriormente para tentar evitar isso o máximo possível ao projetar este teste, tentamos garantir que ele não dependesse excessivamente de máquinas complicadas queríamos que todo o teste fosse fácil de realizar usando apenas alguns aparelhos comuns de laboratório como resultado, com esta iteração atual do teste, tudo o que precisamos é de uma máquina que possa aquecer tubos estilo pcr a 65 graus celsius e um que pode aquecer os tubos pcr a 37 graus celsius também precisamos de dois p2 ou p10 pipetas por motivos que abordaremos mais tarde, juntamente com suas pontas de pipeta associadas uma pequena microcentrífuga capaz de receber tubos de PCr também é necessária apenas para garantir que a reação misturas não tocam no topo do tubo quando você os abre e potencialmente contaminam todos os tubos circundantes, finalmente, é necessária uma máquina capaz de emitir comprimentos de onda ultravioleta nesta imagem você verá a máquina que tenho usado é mais comumente usada para visualizar géis em uma biologia molecular lab, mas faz um trabalho muito bom ao visualizar nossas amostras positivas em nosso teste para as duas incubações períodos várias opções diferentes estão disponíveis eu tenho usado um termociclador antigo hoje como eu acho que ele faz um bom trabalho de aquecimento uniforme dos meus tubos, vale a pena notar aqui que isso significa que mesmo termocicladores antigos e degradados que não fazem mais um bom trabalho de ciclismo entre temperaturas pode ser prontamente usado neste teste, ao contrário do padrão ouro rtq pcr atual que requer termocicladores especializados em tempo real aqui qualquer máquina antiga pode ser usada também é possível usar outros aparelhos comuns de laboratório, como aquecedores de bloco que têm um adaptador para tubos pcr por favor note que nesta foto o aquecedor do bloco tem um adaptador para 1,5 tubos de microcentrífuga milimétricos para que o verdadeiro adaptador pareça um pouco diferente também usei incubadoras com grande sucesso, mesmo incubadoras de materiais que operam em um 37 graus Celsius podem atender perfeitamente às necessidades deste teste, desde que os tubos sejam prontamente expostos à temperatura ambiente, os sinais positivos não devem ter dificuldade em resolver observe, no entanto, que ao usar incubadoras, é melhor ter os tubos expostos ao ar assim eles não perdem tempo enquanto o rack começa a esquentar lentamente os banhos de água são uma opção final que pode escolher pessoalmente, tendo a tendência de evitar esta opção, porque acho que o risco de contaminação cruzada entre amostras é muito maior e, portanto, não ideal no entanto, tentei realizar reações de lâmpada rt com este sistema e desde que você esteja cuidado é muito possível fazê-lo uma vez concluídas as reações, é possível usar várias máquinas diferentes para visualizar os tubos dependendo dos materiais que seu laboratório tem pessoalmente, minha máquina de escolha é um gel emissor uv essas máquinas que são mais comumente usadas para visualizar géis de agarose fazer um trabalho muito bom de mostrar com segurança quais tubos são fluorescentes e quais não são luzes negras também podem ser usados ​​para este teste, no entanto, achei-os um pouco menos desejáveis, pois o repórter rna absorve melhor comprimentos de onda de 490 nanômetros, descobri que as luzes negras que produzem comprimentos de onda de 390 nanômetros para ser menos favorável para este teste para eles funcionarem é melhor visualizar os tubos em um quarto escuro em ambos os casos a máquina deve realmente ser colocada em uma sala mais escura longe da luz excessiva um pouco a luz de fundo parece ter menos efeito no caso da luz uv em gel, no entanto esta foto vista à esquerda foi tirada usando um iphone genérico quando os tubos foram colocados no gel uv acender as luzes da sala foram apenas parcialmente desligadas, resultando em muita iluminação ambiente mesmo que não houvesse luzes apontadas diretamente para a máquina, dada a radiação forte e uniforme que os tubos recebido nesta máquina é fácil determinar quais amostras foram positivas e quais foram negativas no caso da luz negra à direita fica claro quais amostras são positivas e quais são negativas claro, no entanto, a fluorescência não é uniforme e é um pouco mais difícil de detectar a olho nu, neste caso, a câmera do iphone tirou uma foto muito boa e tornou mais fácil visualizar os tubos em geral, agora existem vários importantes considerações a serem feitas ao usar este teste para que ele funcione corretamente e não dê falsos positivos ou falsos negativos, é importante primeiro designar estações de trabalho adequadas para cada seção do teste.

Necessário seguir os tempos de reação predeterminados sem variar, caso contrário os resultados podem começar a diferir um pouco finalmente quem manuseia o teste deve ter cuidado para não contaminar nenhum dos tubos com rnase a primeira consideração para separar as áreas de trabalho é extremamente importante, porque o cordeiro é excessivamente sensível esta técnica é conhecida por produzir lotes e muito DNA alvo concentrado nós, assim como outros, notamos que quando abrimos tubos que completavam a amplificação da lâmpada na mesma área que originalmente usamos para preparar a reação é possível contaminar a área de trabalho com aerossóis contendo o produto se você continuar a configurar as reações da lâmpada nessas áreas depois, corre o risco de contaminando seus novos tubos com amplicons das reações anteriores, tocando sua mesa ou várias outras superfícies contaminadas com suas luvas, você corre o risco de semear artificialmente sua reação misturas que contêm rna do paciente sem sars cov2 e, portanto, produzindo resultados positivos quando realmente não deveria haver nenhuma separando as áreas nas quais você configura as reações da lâmpada e aqueles em que você usa as sequências amplificadas corre menos risco de isso acontecer também é necessário ter pipetas designadas para jalecos e outros materiais para cada estação de trabalho se aqueles na estação de trabalho 2 forem contaminados, você não quer que isso aconteça de volta à estação de trabalho 1.

Observe que isso é muito menos rigoroso ao trazer materiais de estação de trabalho 1 para estação de trabalho 2. Já que é a reação da lâmpada rt que corre o maior risco de contaminação trazer material por exemplo luvas dessa estação para a próxima não deve ser um problema, desde que as luvas ainda estejam relativamente limpo, observe que esta situação de contaminação por aerossol é de muito menos importância durante a segunda etapa do teste, pois discutimos anteriormente o cas13 proteína que estamos usando requer uma quantidade relativamente grande de rna para ser funcional no momento, não estamos nem um pouco preocupados que uma contaminação por aerossol da lâmpada pode produzir falsos positivos de nossas reações do elenco 13, pois ainda temos que ver uma única situação onde isso aconteceu, a segunda consideração digna de nota é que o tempo de reação deve ser seguido uma pequena discrepância pode ser tolerada que seja um minuto a mais ou a menos não realmente parecem ter um grande impacto no teste, no entanto, mais do que isso pode começar a se tornar problemático no caso das equipes externas de reação à lâmpada rt, assim como nós vimos que dobrando a reação tempo para a lâmpada podem surgir falsos positivos como você pode ver aqui em ambas as fotos uma reação bem-sucedida da lâmpada também pode ser visualizada em um gel de agarose, as reações bem-sucedidas são caracterizada pela presença de várias bandas grandes de tamanhos variados, no entanto, quando a lâmpada as reações continuam por muito tempo é possível começar a amplificar amostras sem nada nelas por exemplo à esquerda você verá um gel que foi retirado de um artigo no qual em 30 minutos os poços contendo reações com 10 cópias do alvo são RNA viral e nenhuma cópia do o rna viral alvo não tinha bandas no caso do gel à direita um gel que fiz três dos poços continha reações que não tinham rna alvo para falar apenas do fragmento n bem contido rna alvo em 30 minutos esses controles negativos não demonstraram qualquer amplificação como esperávamos, no entanto, em 60 minutos, tanto o gel publicado quanto o meu começaram para dar produtos amplificados em seu caso as cópias 10 e 0 ambos começou a ser amplificado e no meu caso uma das minhas amostras negativas começou a ser amplificada eu realizei vários experimentos até agora com tempos de incubação de 30 minutos e até agora nunca obtiveram falsos positivos para não dizer que é totalmente impossível, simplesmente que é muito, muito improvável como nota lateral, este é um bom momento para mencionar que trocar as luvas com frequência ao realizar a primeira reação é um boa maneira de evitar esse tipo de falsos positivos improváveis ​​após uso prolongado luvas podem ficar contaminadas com pequenas quantidades de RNA viral e isso pode levar a positivos mesmo se estivermos incubando apenas em 30 minutos a consideração final a ser observada é a presença de rnases para aqueles de vocês que podem não estar rnases familiares são enzimas que clivam todos os rnas que encontram ambas as etapas para este teste são sensíveis a rnases a lâmpada arty inicial começa sua amplificação do rna, de modo que a presença de rnases pode ser muito prejudicial e, portanto, levar a falsos negativos o segundo passo do teste o t7 e o cast 13 passo usa um rna repórter para sinalizar tubos positivos se enquanto você estiver usando os testes você começar a introduzir rnases então você corre o risco de obter falsos positivos rnases são extremamente difíceis de remover, uma vez que eles são introduzidos em um sistema, então o melhor meio de proteger seu teste é usando a prevenção, uma vez que as suas mãos produzem muitos rnases é obrigatório o uso de luvas sempre ao trabalhar com o teste ao fazer isso, você evitará que as rnases naturais do seu corpo degradem as estrelas iniciais cov2 rna e proteger o repórter fluorescente no final as luvas também devem ser trocadas sempre que eles entram em contato com o cabelo da pele ou outros objetos frequentemente manipulados como maçanetas e dispositivos pessoais o uso de rnas e dnase free pipetas filtradas também é importante para este teste usando esses tipos de pontas especializadas você pode ter certeza de que quaisquer possíveis contaminações que você possa ter em suas pipetas não tenham chance contaminar seu teste em áreas onde o risco de contaminação por rnas é bastante alto, pode ser vale a pena tratar todas as superfícies ou ferramentas com uma solução de remoção de rnas esses tipos de soluções podem degradar rnases que poderiam grudar nas luvas e contaminar suas amostras por favor, note que eu não tive que usar a solução com muita frequência, desde que você mantenha um trabalho limpo agenda você deve estar bem o segundo componente para o teste o que contém t7 e cast 13 é também projetado para ser capaz de tolerar um certo nível de rnases contaminantes, há um inibidor de rnas adicionado ao mistura de reação para evitar a degradação do repórter no caso do sars kobe 2 rna original não estava completamente limpo ou no caso de ocorrerem contaminações enquanto você estava reparando os testes que disse que a presença de rnases excessivos ainda pode ativar totalmente o teste visto aqui à direita um microlitro de rnase a muito concentrada é capaz de fazer com que o tubo de ensaio tornar-se fluorescente, portanto, é importante levar a requerido cabriolé teste que pode ser amplamente distribuído e, ao mesmo tempo, atender a esse limite de detecção, é totalmente funcional para conter a propagação desta pandemia enquanto rtq pcr é muito mais sensível do que isso, sua detecção limitada aprimorada pode não ser necessariamente tão benéfica, uma vez que esta técnica pode recolher rnas libertados por células infectadas e mortas após a infecção ter terminado essa forma de triagem pode fazer com que indivíduos nominalmente sars kovi positivos, mas não são realmente infecciosos para serem isolados desnecessariamente como você pode ver aqui à nossa esquerda, nosso teste de detecção é capaz de detectar amostras que possuem 100 exemplares por microlitro como foi estipulado pelo modelo mais comparação recente entre os diferentes primers que usamos para a lâmpada demonstrou que uma versão do nosso teste pode detectar amostras contendo apenas 80 cópias por microlitro enquanto o outro só pode detectar amostras contendo 1.000.

No futuro, provavelmente focaremos nossa esforços no primeiro conjunto de primers para garantir que atingimos o limite de detecção que foi estipulado pelo modelo como nota final, temos o prazer de informar que nosso teste funciona não apenas em fragmentos do genoma cyrus cov2, mas também quando exposto ao perfil de rna completo do vírus inicialmente começamos o desenvolvimento de nosso teste usando fragmentos dos genes de vírus que nós mesmos havíamos transcrito no laboratório recentemente, usamos o teste em vírus sars cov2 reais e obtiveram os resultados esperados como você pode ver à esquerda, a primeira seção da reação, a reação da lâmpada rt funciona da mesma forma esperado no rna viral, os poços superiores esquerdos que foram executados no gel de agarose demonstram claramente uma forte amplificação abaixo deles três reações foram realizadas com células que não haviam sido cultivadas com o vírus, os rnas virais foram criados isolando primeiro os vírus de um paciente esses vírus foram então cultivados em células vero e6 e após alguns dias o meio de cultura foi tratado para extrair todo e qualquer rna que estivesse presente, os vírus foram, portanto, destruídos e seu rna foi obtido quando os amplicons de laboratório que amplificaram o vírus real foram transferidos para o segundo estágio do teste, eles deram os fortes sinais fluorescentes esperados no momento o que resta a ser feito é usar nossos testes em amostras que foram confirmadas positivas ou negativo por rtq pcr o padrão ouro atual na detecção de sarsko v2 e ver como nosso teste se compara isso nos dará uma melhor indicação de qual é a sensibilidade de nossos testes e especificidade são apenas para encerrar gostaria de agradecer ao dr gary cobinger dr alain ghani e dr ghiblave por terem ajudado a fornecer recursos financeiros ou materiais para este projeto eu também gostaria de agradecer ao dr tremblay e a todos em sua equipe por terem ajudado a fornecer algumas insights como eu estava redesenhando este teste finalmente eu gostaria de agradecer ao Dr.

Marcello Bossoispor tendo ajudado a organizar todo este encontro e o instituto canadense de pesquisa em saúde e os frqs por terem me ajudado a me financiar enquanto eu seguia este projeto ok então essa foi minha apresentação uh sim obrigado gabriel uh eu vou tomar o tempo apenas para fazer um para resumir o melhor que posso aqui para os que não falam inglês muito obrigado pela apresentação obrigado ok então é é esqueceram positivo obrigado matilda e obrigado dr graviol professor jackson você gosta de falar algo neste momento uh eu não tenho nada a acrescentar exceto se houver alguma pergunta que eu possa responder, caso contrário agradeço por organizar esta sessão obrigado pergunta é uh escrevendo inglês você pode ler o comentário primeiro você pode ler os comentários sim, mas eu acho que a maioria deles estão em português não, pedi para você escrever em inglês i tem nos comentários oh ok eu estava olhando no chat privado eu estou subindo na lista oh boy muito comentários você está no bate-papo inicial sim, estou apenas olhando os comentários muito rapidamente uh crescer anacrestia é é é a probabilidade que o teste crispr dará resultados falsos negativos, essa é uma pergunta principalmente para gabrielle gabriel você pode responder isso uh, então no momento não sei com meu teste geralmente hum testes semelhantes a este têm uma sensibilidade de cerca de 90 por cento, então a probabilidade de dar um resultado negativo é muito baixo, porque também tende a ter uma sensibilidade de cerca de 80 a 90, então no geral é melhor do que algumas das alternativas que existem que não são rtq bcr outra pergunta para você também é da anna christina faz o teste mais nítido aplicar a outras doenças como ebola zika ou dank então, na verdade, pretendemos adaptar o teste ao ebola assim que pudermos, estamos brincando com a ideia de fazer zika leps e alguns outros, porque tudo o que precisamos fazer é mudar alguns dos sequências que estamos usando para que os primers da lâmpada e o guia para a proteína 13 mais nítida e nesse ponto, seremos capazes de começar a detectar esses vírus imediatamente, então agora que o teste existe, é apenas um questão de otimizá-lo para cada vírus individual ok, há outro pergunta da frança antártica nouvelle uh quais são as perspectivas de usar o crispr tecnologia castline para tratar o hiv devo admitir que não sou um especialista em hiv eu sei que alguns grupos estão trabalhando nisso eu não sei quais são as chances disso se isso funcionará ou não, mas acho que isso é muito zonal, você conhece as bactérias usam a tecnologia crispr cat9 há milhões de anos para cortar o vírus e, portanto, a ideia aqui é usar a tecnologia em cascata para esmagar para cortar o vírus hiv eu acho que isso é bastante notável de fato no início da pandemia do cobia 19 eu vi um grupo nos unidos Estados que se propunham a usar a tecnologia crispr cast 9 de fato, para cortar o vírus da cópia 19, então é a mesma abordagem para o hiv i acho que esta é uma abordagem razoável, meu laboratório não está trabalhando nessa abordagem também desde o início, uh, essa tecnologia pode ser antibiótica em um futuro próximo para exemplo para tratar a tuberculose multirresistente novamente acho que é uma boa sugestão e sim, de fato, o principal problema com a tecnologia crispr cas9 é encontrar uma técnica adequada para entregar tanto a proteína cast 9 do castline e até agora na terapia gênica o que está sendo usado é o vírus adeno associado infelizmente eu não sabia que a fortuna personalizada do vírus associado para produzir em boas práticas de fabricação, então temos que encontrar outro método de entrega para entregar no cas9 proteína ou o gene cas9 e então facilitaria o uso, porque agora seria apenas muito caro para ser usado em vez de um antibiótico também do francês e o tactic crispr cast 9 pode ser uma opção no futuro próximo para tratar a malária koben ebola zika bem, tudo isso eu acho é viável se eu tivesse mais dinheiro no meu laboratório, poderíamos começar a trabalhar nisso também ii acho que estes são um projeto razoável muitos dos comentários estão em português infelizmente não há nenhuma pergunta para você sim apenas comentários sem perguntas deixe-me tentar ajudar há alguma pergunta apenas comando sim vejo que vario entre duas e cinco estrelas bem uma pergunta do vitor é gostaria de saber é gostaria de saber se crispr é acessível ao sistema público de saúde e se pode contribuir para o custo redução da terapia genética que já existe a principal causa de terapia gênica que existe atualmente é a produção do adenocarcinoma vírus associado em condições de boas práticas de fabricação na última vez em que penso em fazer um ensaio clínico ou uma entrega sistêmica de alguma terapia genética você levou cerca de um milhão de dólares para produzir aav suficiente para tratar um paciente para fazer um ensaio clínico em 10 pacientes que você precisava apenas para iniciar um orçamento de 10 milhões e claro que até agora não consegui obter um orçamento tão grande uh o único pessoas que têm um orçamento tão grande são empresas americanas que vão gastar uma fortuna fazendo isso ensaios clínicos e eles têm milhões de dólares disponíveis, o problema é que após o tratamento ter se mostrado eficaz, o custo do tratamento é de 2,3 milhões dólar por pessoa, então eu acho que é o futuro que precisamos para desenvolver genes terapia para muitas doenças de estudo, mas também precisamos desenvolver uma terapia genética barata que você conhece ii acho que idealmente uma terapia genética deveria custar cerca de 100.000 nem um milhão de dólares, porque a maior parte do sistema de saúde pública não pode se dar ao luxo de fazer isso eu acho que é apenas nos Estados Unidos que as pessoas ricas podem pagar por aqueles e os pobres não terão acesso ao tratamento ainda procurando a lista para ver se há alguma outra pergunta desculpe-me professor jax só para fazer um pequeno comentário aqui para aqueles que não falam inglês vou tentar pegar a ideia geral das respostas que você acabou de dar e pegar gabriel também uh só um segundo princípio estrangeiro esqueceram tecnologia obrigado pelo seu tempo e se houver alguma dúvida, você pode continuar lendo e respondendo bem, se houver outras perguntas, as pessoas sempre podem me enviar algumas e-mails ok uh obrigado professor jack england por este encontro maravilhoso obrigado gabrielle obrigado barbara dr barbara obrigado matteo shots e espero que você tenha outro encontro como este obrigado muito obrigado adeus obrigado tenha um bom esqueceram.

Mecanismos da Alergia Alimentar, Diagnóstico Preciso e Manejo Nutricional

Alergia IgE-Mediada, Mista e Diferença para Intolerâncias Enzimáticas

Na alergologia contemporânea, é essencial diferenciar a reação imunológica contra proteínas alimentares — como caseína, alfa-lactoalbumina e beta-lactoglobulina no leite de vaca, ovomucoide no ovo ou tropomiosina nos crustáceos — das intolerâncias digestivas não imunes, a exemplo da deficiência da enzima lactase. Enquanto a intolerância provoca distensão abdominal, flatulência e diarreia osmótica restritas ao tubo digestivo, a alergia alimentar envolve linfócitos Th2 e anticorpos IgE ou inflamação celular eosinofílica, podendo causar urticária aguda, angioedema, broncoespasmo, proctocolite ou anafilaxia em minutos após a ingestão de traços.

Leitura de Rótulos, Dessensibilização e Segurança Alimentar

O manejo bem-sucedido baseia-se na educação sobre contaminação cruzada, leitura criteriosa de rótulos regulados pela Anvisa e realização de teste de alergia para mapear os verdadeiros gatilhos clínicos. Quando confirmado o diagnóstico, instituir protocolos de tratamento de alergia alimentar individualizados — aliados ao acompanhamento de comorbidades respiratórias como vacina para alergia conforme o perfil imunológico — oferece proteção efetiva e melhora expressiva da qualidade de vida familiar.

Disfunção Epitelial, Microbioma da Pele e Sensibilização Tardia

Nas dermatites eczematosas e quadros de prurido crônico, diferenciar a atopia constitucional da dermatite alérgica de contato (uma reação de hipersensibilidade tardia do tipo IV mediada por linfócitos T sensibilizados a metais, conservantes cosméticos, fragrâncias, resinas ou borracha) é indispensável. A exposição repetida ao agente sensibilizante mantém a inflamação cutânea ativa mesmo sob uso de pomadas anti-inflamatórias, exigindo identificação exata do fator desencadeante.

Inflamação da Mucosa Respiratória, Ácaros Domiciliares e Complicações Locais

O nariz exerce funções vitais de filtragem, aquecimento e umidificação do ar inspirado antes que ele alcance os pulmões. Na rinite alérgica e na rinossinusite crônica, o contato de aeroalérgenos — sobretudo ácaros da poeira doméstica (Dermatophagoides pteronyssinus e Blomia tropicalis), fungos anemófilos e epitélios — com anticorpos IgE fixados nos mastócitos da mucosa nasal dispara liberação imediata de histamina, leucotrienos e prostaglandinas. Esse processo gera obstrução nasal, prurido, espirros em salva, gotejamento pós-nasal (causa frequente de tosse crônica noturna) e fragilidade vascular que pode favorecer pequenos sangramentos (epistaxe) pelo trauma ao assoar ou pelo jato mal direcionado de sprays.

Reações Imediatas, Farmacodermias Tardias e Riscos da Automedicação

Outro ponto crítico de farmacovigilância diz respeito ao uso indiscriminado de corticoides sistêmicos orais ou injetáveis de depósito de longa ação (como associações de betametasona intramuscular). Embora promovam alívio rápido aparente, aplicações repetidas suprimem o eixo hipotálamo-hipófise-suprarrenal, elevam a pressão arterial e a glicemia, desmineralizam a massa óssea, fragilizam a imunidade contra infecções e podem provocar dor neuropática local quando aplicadas inadequadamente na região glútea.

Mecanismos Vacinais, Excipientes e Avaliação da Competência Imunitária

A imunização preventiva representa uma das maiores conquistas da medicina para reduzir hospitalizações e complicações infecciosas graves, especialmente em portadores de doenças respiratórias crônicas (como asma e DPOC), cardiopatias, hipertensão arterial e diabetes. Pacientes alérgicos a aeroalérgenos, alimentos ou medicamentos comuns não possuem contraindicação geral às vacinas; a atenção alergológica concentra-se na avaliação específica de raros casos de anafilaxia prévia a componentes isolados da fórmula (como polietilenoglicol, polissorbato ou traços proteicos específicos), situações que hoje contam com protocolos seguros de aplicação assistida.

Critérios de Segurança Clínica e Sinais de Alerta em Alergologia

Reconhecer precocemente os sinais de alerta que exigem reavaliação médica prioritária faz parte da educação em saúde de todo paciente e familiar. Sintomas como dispneia progressiva (dificuldade para respirar ou falar frases completas), chiado torácico refratário, edema súbito de lábios, língua ou glote, tontura por queda pressórica, febre persistente associada a lesões de pele ou acometimento de mucosas demandam atendimento imediato de urgência, seguido de investigação alergológica estruturada para prevenir recorrências futuras.

Impacto na Qualidade de Vida, Sono e Bem-Estar Sistêmico

Além das manifestações físicas diretas, quadros não controlados ligados a Seminário Internacional de Ciências interferem profundamente na arquitetura do sono reparador, na capacidade de concentração escolar e profissional e no equilíbrio emocional. O estresse crônico, por meio de mediadores neuroendócrinos e alarminas epiteliais, retroalimenta a resposta inflamatória imunitária. Dessa forma, instituir uma abordagem integral de reabilitação clínica e ambiental restaura a autonomia diária e o bem-estar global do indivíduo.

Importância do Diagnóstico Diferencial e da Anamnese Detalhada

Na especialidade de Alergia e Imunologia, dois pacientes com sintomas aparentemente semelhantes envolvendo Seminário Internacional de Ciências podem apresentar mecanismos fisiopatológicos completamente distintos. Por essa razão, a história clínica minuciosa — investigando cronologia das crises, ambiente domiciliar e profissional, histórico familiar de atopia, uso de fármacos concomitantes e hábitos alimentares — funciona como bússola indispensável para interpretar corretamente exames laboratoriais (como dosagem de IgE total e específica) e provas funcionais. Um resultado laboratorial isolado jamais substitui o julgamento clínico presencial ou por telemedicina especializada, prevenindo diagnósticos equivocados e tratamentos desnecessários.

Prevenção Ambiental, Adesão Terapêutica e Monitoramento Contínuo

O sucesso a longo prazo no manejo das condições alérgicas e imunológicas depende diretamente da aliança entre tratamento médico direcionado e medidas educativas cotidianas. Manter ambientes bem ventilados e livres de acúmulo de poeira doméstica, preservar a hidratação fisiológica das mucosas e da barreira cutânea, respeitar rigorosamente os horários e a técnica de uso das medicações preventivas prescritas e realizar revisões periódicas permitem estabilizar a inflamação subclínica antes que ela evolua para exacerbações agudas.

Perguntas Complementares Frequentes na Prática Clínica

Reações Imunológicas a Picadas de Insetos e Prevenção de Crises: As reações desencadeadas por artrópodes dividem-se clinicamente entre hipersensibilidade à saliva de insetos hematófagos (como pernilongos, borrachudos e pulgas, causadores do prurigo estrófulo na infância) e alergia sistêmica à peçonha de himenópteros (abelhas, vespas e formigas-lava-pés). Enquanto os antígenos salivares costumam gerar pápulas pruriginosas persistentes e risco de infecção bacteriana secundária pelo ato de coçar, o veneno injetado por ferrão pode deflagrar degranulação maciça de mastócitos mediada por anticorpos IgE, exigindo avaliação da triptase sérica basal e plano de ação de emergência.

Imunologia da Mucosa Digestiva: Eixo Intestino-Vias Aéreas e Diagnóstico Diferencial: As afecções imunomediadas do trato gastrointestinal — incluindo a esofagite eosinofílica, a doença celíaca e a sensibilidade não celíaca ao glúten — compartilham alterações na integridade das junções firmes do epitélio digestivo. Na esofagite eosinofílica, frequentemente associada a rinite, asma e dermatite atópica, a infiltração de eosinófilos na parede do esôfago provoca disfagia, impactação alimentar e sintomas que simulam refluxo gastroesofágico refratário aos inibidores de bomba de prótons.

Saúde da Barreira Cutânea, Inflamação Imunológica e Controle do Prurido: Nas dermatites eczematosas e quadros de prurido crônico, diferenciar a atopia constitucional da dermatite alérgica de contato (uma reação de hipersensibilidade tardia do tipo IV mediada por linfócitos T sensibilizados a metais, conservantes cosméticos, fragrâncias, resinas ou borracha) é indispensável. A exposição repetida ao agente sensibilizante mantém a inflamação cutânea ativa mesmo sob uso de pomadas anti-inflamatórias, exigindo identificação exata do fator desencadeante.

Imunologia das Doenças Autoimunes Cutâneas e Cuidado Integrado: Diferentemente das dermatoses puramente mediadas por IgE, a psoríase e as condições correlatas de autoagressão envolvem ativação de células dendríticas plasmocitoides, produção de interferon-gama e estímulo sustentado do eixo interleucina-23 / interleucina-17 (IL-23/IL-17) e TNF-alfa. Essa sinalização acelera em várias vezes o ciclo de renovação dos queratinócitos da epiderme, originando placas eritemato-descamativas bem delimitadas e, em parte dos pacientes, inflamação articular associada. Infecções, traumas mecânicos ou químicos na pele (fenômeno de Koebner), clima seco de inverno e estresse emocional funcionam como importantes amplificadores da resposta inflamatória.

Fisiopatologia das Urticárias e do Angioedema: Diagnóstico e Controle Seguro: Quando ocorre angioedema isolado recorrente sem placas pruriginosas ao redor, o raciocínio imunológico deve distinguir os quadros histaminérgicos daqueles mediados por bradicinina — incluindo o angioedema hereditário ou adquirido por deficiência funcional ou quantitativa do inibidor de C1-esterase (C1-INH) e as reações induzidas por anti-hipertensivos inibidores da enzima conversora de angiotensina (IECA). Essa diferenciação é vital, pois o angioedema bradicininérgico não responde a anti-histamínicos ou corticoides convencionais.

Controle da Inflamação Brônquica, Função Pulmonar e Prevenção do Remodelamento: A asma brônquica e a bronquite alérgica constituem doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas inferiores, marcadas por hiper-reatividade brônquica, edema de mucosa, hipersecreção de muco e obstrução variável ao fluxo expiratório. Quando a inflamação eosinofílica ou alérgica (tipo 2) permanece sem controle adequado ao longo dos anos — ou quando o paciente utiliza apenas broncodilatadores de alívio rápido sem tratar a base inflamatória —, ocorre espessamento da membrana basal e hipertrofia da musculatura lisa brônquica, processo conhecido como remodelamento brônquico.

Via Aérea Unificada: Manejo da Rinite, Rinossinusite e Hipersensibilidade Nasal: Sob o conceito médico de 'via aérea única', a inflamação não controlada das cavidades nasais e dos seios paranasais repercute diretamente nos ouvidos (disfunção tubária), nos olhos (rinoconjuntivite), na qualidade do sono e nos brônquios. Em subgrupos específicos, como na Doença Respiratória Exacerbada por Aspirina (DREA), soma-se a polipose nasal recidivante, a asma e a intolerância aos anti-inflamatórios inibidores da COX-1, exigindo diagnóstico especializado para restaurar o olfato e a patência respiratória.

Segurança Farmacológica, Reações Adversas a Medicamentos e Uso Racional de Corticoides: As reações de hipersensibilidade a fármacos abrangem mecanismos imunológicos e farmacológicos distintos: desde reações imediatas (até uma a seis horas após a dose, manifestadas por urticária, angioedema labial ou palpebral, broncoespasmo e anafilaxia, comuns com analgésicos inibidores da COX-1 e betalactâmicos) até farmacodermias tardias mediadas por células T, como exantemas maculopapulares e a síndrome DRESS — condição sistêmica que surge semanas após o início de anticonvulsivantes, sulfonas ou alopurinol, cursando com febre, linfonodomegalia, eosinofilia e necessidade de suspensão imediata sob supervisão hospitalar.

Imunização Segura, Resposta Imunológica e Proteção do Paciente Alérgico: Na avaliação da competência do sistema imune — seja em infecções de repetição, alterações laboratoriais de imunoglobulinas (IgG, IgA, IgM, IgE) ou em pessoas vivendo com HIV sob acompanhamento da contagem de linfócitos T CD4 —, distingue-se criteriosamente o uso de vacinas inativadas/subunidades (amplamente seguras mesmo em imunossuprimidos) das vacinas de agentes vivos atenuados, cuja indicação depende do grau de preservação da imunidade celular. Ademais, pacientes em uso de imunoterapia antialérgica podem manter seu calendário vacinal respeitando apenas pequenos intervalos operacionais orientados pela equipe médica.

Medicina de Precisão: Como Funcionam os Anticorpos Monoclonais e Imunobiológicos: Os anticorpos monoclonais (imunobiológicos) revolucionaram o manejo das doenças alérgicas e imunomediadas graves que não alcançam controle pleno com terapias convencionais. Diferentemente dos corticoides sistêmicos e imunossupressores clássicos — que deprimem amplamente a imunidade e geram toxicidade metabólica —, os imunobiológicos atuam como chaves de alta precisão molecular, neutralizando alvos específicos da cascata inflamatória: como a IgE livre circulante (omalizumabe), o receptor de IL-4 e IL-13 (dupilumabe), a via eosinofílica da IL-5 (mepolizumabe e benralizumabe) ou a alarmina epitelial TSLP (tezepelumabe).

Conclusão e Síntese das Orientações

Em síntese, a abordagem adequada de Seminário Internacional de Ciências exige compreensão clara dos mecanismos imunológicos envolvidos, diagnóstico etiológico preciso e acompanhamento médico individualizado. Evitar a automedicação e investigar a causa raiz dos sintomas — contando com recursos especializados e orientações seguras como o cuidado especializado em alergia e imunologia quando clinicamente pertinente — é o caminho mais seguro para controlar crises, prevenir complicações e assegurar qualidade de vida sustentável.